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Western-blot 實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)步驟及試劑選擇指南

Western，也稱Westernblot、Westernblotting、Western印跡，是用抗體檢測蛋白的常用的方法之一。本文分別介紹western的實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)步驟以及試劑選擇指南。實(shí)驗(yàn)原理：Western技術(shù)是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳后，經(jīng)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第...

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實(shí)驗(yàn)室常用細(xì)胞株簡介

細(xì)胞株名稱ATCC編號(hào)細(xì)胞來源細(xì)胞種類生長狀態(tài)293CRL-1573人胎腎貼壁、上皮樣2215無人肝癌貼壁、上皮樣127TAgCRL-2817小鼠多能胚胎干細(xì)胞胚胎型293/CHE-FcCRL-2368人腎上皮細(xì)胞、貼壁3T3-L1CL-173小鼠胚胎成纖維成纖維3T6CCL-96小鼠胚胎成纖維細(xì)胞、貼壁A431CRL-1555人表皮細(xì)胞癌上皮細(xì)胞、貼壁A549CCL-185人肺癌貼壁、上皮樣A9CRL-6319小鼠結(jié)締組織成纖維細(xì)胞、貼壁AR42JCRL-1492大鼠胰腺腫...

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原代細(xì)胞的培養(yǎng)與建系

細(xì)胞的來源多樣，培養(yǎng)方法也各不相同，凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞經(jīng)分散接種之手段稱為傳代。凡能經(jīng)傳代方式進(jìn)行再次培養(yǎng)的細(xì)胞稱為傳代細(xì)胞。若能穩(wěn)定生長傳10~20代以上的細(xì)胞可確立為細(xì)胞系。若有條件能開展單細(xì)胞克隆、純化，經(jīng)大量擴(kuò)增后所形成的生物學(xué)特性穩(wěn)定的克隆化細(xì)胞群，稱之為細(xì)胞株或克隆細(xì)胞。此過程稱為細(xì)胞的純化或細(xì)胞克隆。這些基本技術(shù)是從事細(xì)胞培養(yǎng)工作的基礎(chǔ)，只有熟悉和掌握了基本技術(shù),才可能更快捷地學(xué)習(xí)和掌...

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