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一步法RT-qPCR實(shí)驗(yàn)優(yōu)化小技巧

常見(jiàn)的RT-qPCR流程一般分為RNA提取，逆轉(zhuǎn)錄、熒光定量PCR三個(gè)步驟，當(dāng)有的課題需要對(duì)某物種進(jìn)行多種處理后，檢測(cè)某個(gè)基因的表達(dá)水平，以驗(yàn)證該基因應(yīng)對(duì)不同脅迫壓力的耐受力；或者經(jīng)某種病原菌侵染后，檢測(cè)寄主不同基因的表達(dá)水平，以探究可能涉及的通路及互作機(jī)理等……對(duì)于這幾類(lèi)樣本數(shù)量較大，但樣本只需要檢測(cè)一次的實(shí)驗(yàn)方案，我們常常推薦一步法RT-qPCR，即逆轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR配制一管體系，只需一次上機(jī)即可完成表達(dá)量的檢測(cè)。由于將RNA逆轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR的體系配制合為一步，...

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石蠟切片Protocol實(shí)驗(yàn)需要注意哪些要點(diǎn)呢？

石蠟切片是一種常見(jiàn)的組織學(xué)技術(shù)，用于觀察組織的微觀結(jié)構(gòu)。在進(jìn)行石蠟切片實(shí)驗(yàn)時(shí)，有許多細(xì)節(jié)需要注意，這些細(xì)節(jié)往往決定了切片的質(zhì)量和結(jié)果的準(zhǔn)確性。那么石蠟切片Protocol實(shí)驗(yàn)需要注意哪些要點(diǎn)呢？本期內(nèi)容將為你揭示一些關(guān)鍵的細(xì)節(jié)，助你獲得最佳的石蠟切片效果。1.組織固定1）取新鮮組織，分割塊的大小，宜小不宜大，一般不超過(guò)1cm3，用預(yù)冷的PBS沖洗，置于10%的福爾馬林固定液中固定24小時(shí)。2）取出組織，蒸餾水沖洗30分鐘。2.組織脫水，包埋，切片1）自動(dòng)脫水：設(shè)定脫水程序，7...

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細(xì)胞貼壁不均勻的原因有哪些呢？

在培養(yǎng)貼壁細(xì)胞的時(shí)候，偶爾會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞接種后貼壁不均勻的情況。有的地方長(zhǎng)得非常密集，有的地方卻太稀疏。雖然這對(duì)于常規(guī)培養(yǎng)并不算大問(wèn)題，但有時(shí)則可能影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。所以一旦遇到貼壁不勻，建議排查原因并優(yōu)化操作方案。那么，造成細(xì)胞貼壁不均勻的原因有哪些呢？本期內(nèi)容一起來(lái)跟著小編的腳步學(xué)習(xí)一下吧！情況一：局部生長(zhǎng)密集，密集處呈不規(guī)則分布原因：一般是接種時(shí)沒(méi)有混勻，或者細(xì)胞傳代時(shí)沒(méi)有消化che底從而形成細(xì)胞團(tuán)塊導(dǎo)致的解決方案：繼續(xù)培養(yǎng)1-2天，待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，重新消化接種，接種時(shí)...

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原代細(xì)胞分離的原理

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)是一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，它涉及從生物體中提取組織或細(xì)胞，并將它們轉(zhuǎn)移到體外環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)。這些來(lái)源包括各種組織器官、外周血和胚胎等。在培養(yǎng)過(guò)程中，原代細(xì)胞的生長(zhǎng)速度相對(duì)較慢，通常在培養(yǎng)的10代內(nèi)停止生長(zhǎng)。因此，通常將培養(yǎng)的細(xì)胞歸類(lèi)為原代細(xì)胞培養(yǎng)，這些細(xì)胞包括第1到第10代的細(xì)胞。下面讓我們一起來(lái)看看原代細(xì)胞分離的原理吧！實(shí)驗(yàn)原理：原代細(xì)胞保持了體內(nèi)原始細(xì)胞的生物學(xué)特性，接近于體內(nèi)的生長(zhǎng)特性。因此，它們?yōu)檠芯可矬w細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝和繁殖提供了有力的工具。此外，原代細(xì)胞培...

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為什么要選擇無(wú)血清的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基呢？

間充質(zhì)干細(xì)胞是一種具有多向分化潛能的細(xì)胞，能夠分化成多種類(lèi)型的細(xì)胞，包括骨、軟骨、脂肪、肌肉等。因此，它們?cè)诮M織工程和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。然而，要實(shí)現(xiàn)這些應(yīng)用，首先需要獲得足夠數(shù)量的間充質(zhì)干細(xì)胞，并且這些細(xì)胞必須保持其分化潛能和生物活性。間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基通過(guò)提供必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、生長(zhǎng)因子和其他關(guān)鍵成分，為間充質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化提供了有力的支持。這些成分能夠模擬體內(nèi)環(huán)境，使間充質(zhì)干細(xì)胞在體外培養(yǎng)中能夠正常增殖和分化，同時(shí)保持其多向分化潛能。現(xiàn)如今。市面上出現(xiàn)了很多...

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